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在尿液样本中加入蛋白沉淀剂和丽春红S，离心，蛋白质-染料复合物被沉淀下来，将沉淀物加入碱性溶液溶解后，分光光度法检测560nm处吸光度，计算蛋白含量。尿蛋白检测试剂盒(丽春红比色法)主要用于定量检测尿液中蛋白含量，较双缩脲法灵敏，对白蛋白的敏感性比球蛋白要高。

• 蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
  
• 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
  
• 待测样本蛋白含量＜0.1g/L时，可用1mL样本加0.1mL 10×丽春红S试剂，混匀，余下操作同上。
  
• 该试剂盒也可以用酶标仪检测，可检测1000T以上。
  
• 本法较为灵敏，较比浊法误差小，胆红素＜4mg/L时对结果无影响，也不受室温影响。为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存。
  
• 离心沉淀后上清液必须全部去除，但不损失沉淀物，否则可影响比色结果。为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 取适量10×丽春红S试剂，按1:9加入蒸馏水，稀释至1×，室温可保存2～3个月。
  
• 取1mL蛋白标准配制液加入到蛋白标准(BSA)中，充分溶解后配制成20mg/mL的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
  
• 取适量20mg/mL蛋白标准，稀释至浓度分别为0、200、400、600、800、1000、1200、1600μg/mL或所需浓度。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中；例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/mL蛋白标准溶解于蔗糖中，一般也可以用0.9%NaCl或PBS作为溶解BSA稀释液。稀释后的蛋白标准也应-20℃长期保存。
  
• 制作蛋白标准曲线：各取100μL上述稀释度的蛋白标准，与测定样本操作相同（见第6步）。”0”号管空白调零，比色杯光径1cm，560nm比色，制成标准曲线。
  
• 半定量实验：取3～5mL新鲜尿液转移入小试管，滴加磺基水杨酸溶液3～4滴，形成界面，立即观察，如有浑浊，提示尿液中含有蛋白质，浑浊深浅表示含量多少。
  

  阴性(-)	不显浑浊
  可疑(±)	轻微浑浊，隐约可见，含蛋白量约为0.05～0.2g/L
  (+)	明显浑浊，无颗粒出现，含蛋白量约为0.3g/L
  (2+)	稀薄乳样浑浊，出现颗粒，，含蛋白量约为1g/L
  (3+)	乳浊，有絮片状沉淀，含蛋白量约为3g/L
  (4+)	絮片状沉淀，含蛋白量＞5g/L

• 取离心管根据上述半定量实验测得的蛋白浓度按下表要求加入待测样本和蒸馏水，再加入1mL 1×丽春红S试剂，混匀，3500g离心，将上清缓缓倒出后，倒置于滤纸上数分钟，用滤纸条吸附管壁上多余的试剂(勿触及管低沉淀)，再加入2mL Alkaline Buffer至沉淀中，充分混合使沉淀溶解。
  

  蛋白浓度	待测样本	蒸馏水
  ＜1g/L	100μL	—
  1～3g/L	50μL(测得值×2)	50μL
  >3g/L	10μL(测得值×10)	90μL

• 分光光度计测定560nm波长处的吸光度，如无560nm，540～595nm之间的波长也可，根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。